Técnicas de revelado de TLC (I)

Los compuestos orgánicos suelen aparecer incoloros sobre el fondo blanco de una placa de TLC, lo que significa que después de ejecutar una TLC, los químicos a menudo no pueden simplemente ver dónde se encuentran los compuestos. Los compuestos tienen que ser “revelados” después de la elución, lo que significa convertirlos temporalmente en algo visible.

Los métodos de visualización pueden ser no destructivos (el compuesto no se modifica después del proceso) o destructivos (el compuesto se convierte en algo nuevo después del proceso. La visualización de una placa de TLC bajo luz ultravioleta no es destructiva, mientras que la utilización de una mancha química es destructiva.

Técnicas de revelado no destructivas o semidestructivas

Absorción Ultravioleta

El método de visualización no destructivo más común para las placas de TLC es la luz ultravioleta (UV). Se puede usar una lámpara UV de onda corta (254nm) o luz ultravioleta de onda larga (365nm) en una placa de TLC con sólo tocar un botón. La mayoría de las placas TLC compradas comercialmente contienen un material fluorescente (por ejemplo, sulfuro de zinc) en la sílice o la alúmina, por lo que el fondo de la placa aparecerá verde cuando se vea con la luz ultravioleta de onda corta. Si un compuesto absorbe 254nm luz ultravioleta, aparecerá oscuro, ya que el compuesto impide que el material fluorescente reciba la luz ultravioleta.

Este método es tan rápido y fácil que a menudo es el primer método de visualización probado. Es muy útil para visualizar compuestos aromáticos y sistemas altamente conjugados, ya que éstos absorben fuertemente los UV. La mayoría de los otros grupos funcionales no absorben la luz UV en las longitudes de onda utilizadas y no aparecerán oscuros bajo la lámpara UV, aunque todavía estén allí. No hace daño probar la UV después de realizar la TLC con todos los compuestos por si acaso. Dado que los compuestos permanecen inalterados después de ser vistos con la luz UV, una técnica de visualización adicional puede ser usada después en la misma placa.

Figura 1: a) Inclinar una lámpara UV para visualizar una placa de TLC, b) Caja para proteger los ojos de los daños causados por los rayos UV, c) Apariencia bajo los rayos UV.
Figura 1: a) Inclinar una lámpara UV para visualizar una placa de TLC, b) Caja para proteger los ojos de los daños causados por los rayos UV, c) Apariencia bajo los rayos UV.

Procedimiento para la visualización con luz UV de una placa de TLC

  1. Use una lámpara UV para ver su placa TLC desarrollada pulsando el botón de onda corta. Dependiendo de lo que haya disponible, puede inclinar la lámpara UV en un ángulo en un área oscura de la habitación (Figura 1a), o puede mirar la placa dentro de una caja diseñada para proteger los ojos del daño de los rayos UV (Figura 1b).

    Nota de seguridad: Se debe tener cuidado de no mirar nunca directamente a la fuente de UV, y de minimizar la exposición a los ojos.

  2. El fondo de la placa aparecerá verde bajo la luz UV de onda corta, y los compuestos activos UV aparecerán oscuros (Figura 1c). Use un lápiz para rodear ligeramente las manchas, ya que desaparecerán cuando se elimine la luz UV.

  3. Algunos compuestos en sí mismos son fluorescentes (Figura 2), apareciendo una variedad de colores cuando se exponen a la luz UV de onda corta o larga (el púrpura brillante o el azul es el más común). Registre este tipo de observaciones en su cuaderno si las ve, ya que son raras, y por lo tanto son una excelente herramienta de identificación. Son más comunes con compuestos altamente conjugados.

  4. La placa de TLC puede ser visualizada con algún otro método adicional si se desea.

Figura 2: Soluciones de fluoresceína y rodamina B vistas con: a) Luz visible, b) UV de onda corta, c) UV de onda larga.
Figura 2: Soluciones de fluoresceína y rodamina B vistas con: a) Luz visible, b) UV de onda corta, c) UV de onda larga.

Yodo

Un método de visualización semidestructivo comúnmente usado es exponer una placa de TLC desarrollada al yodo (I2) vapor. Se puede crear una “cámara de yodo” añadiendo unos pocos cristales de yodo a una cámara de cromatografía, o añadiendo unos pocos cristales de yodo a una cámara que contenga una porción de sílice o alúmina en polvo (Figura 3a). Cuando se coloca una placa de TLC desarrollada en la cámara y se tapa, el yodo se sublima y reacciona con los compuestos de la placa, formando manchas de color amarillo-marrón (Figura 3d). La coloración se produce porque el yodo forma complejos coloreados con muchos compuestos orgánicos. Esta mancha funcionará con aproximadamente la mitad de los compuestos que pueda encontrar.

Este método se considera “semidestructivo” porque la complejación es reversible, y el yodo se evaporará eventualmente de la placa de TLC, dejando atrás el compuesto original. Cuando la coloración se desvanece, es teóricamente posible utilizar otra técnica de visualización en la placa de TLC, aunque es posible que el compuesto también se haya evaporado en ese momento.

Figura 3: a) Una cámara de yodo usando gel de sílice, b-d) Insertar una placa en la cámara y empujar, e) Placa de TLC desarrollada con yodo.
Figura 3: a) Una cámara de yodo usando gel de sílice, b-d) Insertar una placa en la cámara y empujar, e) Placa de TLC desarrollada con yodo.

Procedimiento para la visualización de la placa de TLC con yodo

  1. Si no está ya preparada, haga una “cámara de yodo” (figura 3a): en una campana extractora, coloque unos pocos centímetros de sílice o alúmina en polvo en una cámara de TLC con tapa de rosca y añada unos pocos cristales de yodo sólido (nota de seguridad: la sílice y la alúmina son irritantes para los pulmones, y el vapor de yodo se considera irritante y tóxico). Un vaso de precipitados y un cristal de reloj no funcionarán en este contexto ya que los vapores de yodo se escaparán. Deje que la sílice o la alúmina y el yodo se asienten juntos durante un tiempo con agitación suave periódica, y eventualmente el polvo se volverá naranja al adsorber el vapor de yodo.
  2. En una campana extractora, coloque la placa de TLC desarrollada en la cámara de yodo con unas pinzas (Figura 3b) y cierre la tapa. Agite suavemente la cámara para enterrar la placa de TLC en la sílice o alúmina teñida de yodo (Figura 3c) hasta que las manchas se coloreen (Figura 3d). Muchas manchas aparecerán de color amarillo-marrón casi inmediatamente, y pueden oscurecerse con el tiempo. En el caso de muchos compuestos, se tarda menos de 10 segundos en desarrollar una placa, pero algunos compuestos requieren 10 minutos o más. (Nota: los alcoholes, los ácidos carboxílicos y los haluros de alquilo a menudo no se tiñen).
  3. Registre rápidamente las observaciones apropiadas de la cromatografía en su cuaderno, o circule las manchas con un lápiz, ya que los colores pronto se desvanecerán al evaporarse el yodo de la placa. Se puede intentar una visualización posterior después de que el color se desvanezca.

Para más información Thin Layer Chromatography (TLC)